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旋渦混合器對于紫杉醇的增溶作用的應用

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-08-02 14:58【

口服給藥簡單,方便,患者依從性高,是藥物遞送 的最優(yōu)選途徑。但目前超過 40%市售藥物、60%研發(fā) 中藥物都存在難溶性問題。得益于載體輔料的開發(fā)應 用,改善疏水性藥物的溶解性和生物利用度已有多種方法,如: 使用磷脂復合物、生物相容性聚合物、固體分 散體、脂質體或膠束等。但目前滿足上述方法要 求、符合中藥成分特性的輔料尤為缺乏。本課題組前 期發(fā)現一些糖基化苷類化合物在水性環(huán)境中,能夠形 成與表面活性劑相似的結構,可作為固體分散體的載 體,實現難溶性藥物的高效增溶。羅漢果甜苷是羅 漢果的甜味成分。植物含量較高且水溶性好,目前已 經有純度 98%以上成品用作食品添加劑,其甜度為蔗 糖的 300 倍。羅漢果苷 V 是羅漢果甜苷的主要成分, 是一種天然小分子化合物,由親水性葡萄糖基和疏水 性三萜類兩部分組成,與已報道的糖苷類增溶載體結 構相似,故選其為載體,以研究其對難溶性藥物的增溶 效果。羅漢果苷 V 甜度高,熱穩(wěn)定性好,色澤淺,易于使用,不受 pH 值( pH 值在 2~10) 的影響。它在中國、 美國、日本等一些國家作為非營養(yǎng)性天然甜味劑而聞 名。同時,含葡基輔料還可能通過與葡萄糖轉運體 1( glucose transporter 1,GLUT1) 結合實現跨越血-腦屏 障,進而實現對目標藥物的腦靶向轉運。



1 儀器與試藥

1.1 儀器


LC-2010CHT 液相色譜儀( 含高壓泵、柱溫 箱、自動進樣器、紫外檢測器、LC solution 色譜工作站, 日本島津公司) ; KQ-250DE 型數控超聲波清洗器( 昆山市超聲儀器有限公司) ; BT125D 電子天平( 北京賽多利斯科學儀器有限公司,感量: 0.01 mg) ; XW-80A 旋渦混合器( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ; 旋 轉蒸發(fā)裝置( 含 N-1100 型旋轉蒸發(fā)儀、OSB-2100 型油 浴鍋,上海愛朗儀器有限公司) ; SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用 真空泵( 鄭州長城科工貿有限公司) ; DKZ 系列電熱恒 溫振蕩水槽( 上海一恒科技有限公司) ; 2XZ-2 型旋片 式真空泵( 臨海市永昊真空設備有限公司) ; 差示掃描 量熱儀 NETZSCH DSC 204( NETZSCH GERAETEBAU GmbH) 等。



1.2 試藥

紫杉醇對照品( 阿拉丁,含量: 99%,批號: E1822047) ; 羅漢果苷 V( 成都普瑞法科技開發(fā)有限公 司,含量: 98%,批號: PRF8093001) ; 去離子水; 乙腈為 色譜純; 其他試劑為分析純。



2 方法與結果

2.1 紫杉醇-羅漢果苷 V 物理混合物的制備


取紫杉醇適量,按 1∶5,1∶10,1∶15,1∶20( W/W) 添加相應 量的羅漢果苷 V,置于研缽中研細,混勻,置干燥器中 備用。



2.2 紫杉醇-羅漢果苷 V 固體分散體的制備

采用溶 劑法制備紫杉醇-羅漢果苷 V 固體分散體,按 1∶20 ( W/W) 稱取適量紫杉醇和羅漢果苷 V,加入適量的 80%乙醇,常溫下 50 Hz 超聲 30 min,置于 50 ℃ 水浴 鍋中進行減壓濃縮干燥 60 min,即可得到固體分散體。 得到固體狀固體分散體,用研缽研磨均勻,置干燥器中 備用。



2.3 高效液相色譜( HPLC) 測定紫杉醇

2.3.1 色譜條件


色譜柱: Inertsil  ODS-3( 4.6 mm × 250 mm,5 μm) ; 柱溫: 30 ℃ ; 檢測波長: 227 nm; 流速: 1 mL·min-1 ; 流動相: 乙腈-水( 65∶35) 。



2.3.2 紫杉醇對照品溶液的配制

精密稱定紫杉醇 10 mg,置于 10 mL 棕色量瓶中,加入乙腈 5 mL,超聲 使其溶解,用乙腈定容,配制得濃度約為 1 mg·mL-1 紫杉醇對照品溶液。



2.3.3 羅漢果苷 V 對照品溶液的配制

精密稱定羅 漢果苷 V 10 mg,置于 10 mL 棕色量瓶中,加入乙腈 5 mL,超聲使其溶解,用乙腈定容,配制得濃度約為 1 mg·mL-1 羅漢果苷 V 對照品溶液。



2.3.4 紫杉醇-羅漢果苷 V 固體分散體溶液的配制

精密稱定紫杉醇-羅漢果苷 V 固體分散體 10 mg,置于 10 mL 棕色量瓶中,加入乙腈 5 mL,超聲使其溶解,用 乙腈定容,配制得濃度約為 1 mg·mL-1 紫杉醇-羅漢果 苷 V 固體分散體溶液。



2.3.5 專屬性實驗

分別取空白溶劑、羅漢果苷 V 對 照品溶液、紫杉醇對照品溶液和紫杉醇-羅漢果苷 V 固 體分散體溶液,按“2.3.1”條件,進行 HPLC 分析,紫杉 醇典型色譜圖見圖 1。結果表明,在本色譜條件下,紫 杉醇峰形良好,保留時間約為 6.8 min,空白溶劑和羅 漢果苷 V 對主峰的測定無干擾。



2.3.6 檢測限及定量限

取“2.3.2”項制備的紫杉醇 對照品溶液,按一定比例稀釋,得到一系列濃度溶液, 進行 HPLC 分析,紫杉醇檢測限( S /N= 3) 和定量限 ( S /N= 10) 分別為 20 ng·mL-1 和 50 ng·mL-1 ( n = 5) 。 2.3.7 線性關系考察 取“2.3.2”項制備的紫杉醇對 照品溶液,按一定比例稀釋,得到濃度分別為 0. 05, 0.1,0.2,1,5,10,25,50 μg·mL-1 的標準液,按“2.3.1” 項條件進行 HPLC 分析,以紫杉醇峰面積( A) 為縱坐 標,紫杉醇濃度( C,μg·mL-1 ) 為橫坐標進行線性回 歸,結果表明紫杉醇在 0.05 ~ 50 μg·mL-1 內線性關系良好,回歸方程為: A = 44 827 C+387.46,R2 = 1.000 0。



2.3.8 精密度實驗


精密量取“2.3.2”項制備紫杉醇 對照品溶液 0.5 mL,置于 100 mL 量瓶中,加流動相定 容,得到 5 μg·mL-1 紫杉醇溶液。按“2.3.1”項方法重 復測定 6 次,結果峰面積穩(wěn)定,RSD 為 0.8%,表明儀器 精密度良好。



2.3.9 重復性實驗

取紫杉醇-羅漢果苷 V 固體分散 體( 1∶20) 約 20 mg,共 6 份,精密稱定。置于10 mL量 瓶中,加適量乙腈溶解并定容。精密量取 0.5 mL,置 10 mL 量瓶,加流動相定容。配制得相當于紫杉醇含 量 5 μg·mL-1 溶液。按“2.3.1”項方法測定,計算 6 份 樣品中的紫杉醇含量。測定 6 份固體分散體中紫杉醇 的含量分別為 4.3%,4.2%,4.3%,4.4%,4.4%,4.3%, RSD 為 1.3%,表明該方法重復性良好。



2.3.10 穩(wěn)定性實驗

取“2.3.9”項下含紫杉醇 5 μg· mL-1 的紫杉醇-羅漢果苷 V 固體分散體溶液,室溫下放 置 0,2,4,6 h,按“2.3.1”項方法分別測定,紫杉醇峰面 積 RSD 為0.06%,表明紫杉醇溶液在室溫下 6 h 內穩(wěn) 定。



2.3.11 加樣回收率實驗

參考文獻方法,分別 精密稱取紫杉醇適量,按處方比例( 1∶20) 添加羅漢 果苷 V,分 別 制 成 高、中、低 濃 度 溶 液 各 3 份,按 “2.3.1”項方法測定。分析結果見表 1,加樣回收率在 97.9% ~101.5%,方法準確度良好。



3 討論

筆者在本研究以食品添加劑羅漢果苷Ⅴ為固體分 散體的載體,考察不同投藥比例對紫杉醇增溶效果的 影響。以藥物增溶倍數為指標,篩選出最佳的固體分 散體投藥比例為 1∶20( W/W) 。同時,本研究建立了 靈敏度高、準確度好、檢測范圍廣的 HPLC 法,用于測 定制劑中紫杉醇的含量。另外,通過 DSC 分析法驗證 紫杉醇在固體分散體中以無定形或微小晶體形式存 在,顯示出該制劑中紫杉醇的增溶機制是改變其難溶 性的晶體結構及降低晶體的大小。飽和溶解度和體外 溶出的實驗結果表明,以羅漢果苷 V 為載體,能有效 提高難溶性藥物紫杉醇的溶解度,進而改善其溶出速 率和累積溶出度。





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