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渦旋振蕩器對于復(fù)方紫草油體外抑菌的分析

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-08-05 10:03【

紫草屬皮膚科要藥,臨床上紫草油被廣泛用于 各類血熱蘊毒型皮膚創(chuàng)面。我國存在多種紫草制 劑,其中復(fù)方紫草油( 國藥準字 Z20044385) 為目前 唯一的國藥準字紫草油之制劑,臨床多用于燒燙傷、 尿布皮炎等病。該藥以麻油為基質(zhì),主要組成包括 紫草、白芷、忍冬藤、冰片。以上組分中,冰片的抑菌 作用研究相對完備,體外抑菌實驗證實,冰片對變形 桿菌、金黃色葡萄球菌等均具有較好的抑制效果,但冰片在復(fù)方紫草油中濃度不超過 2. 5% ,目前尚 缺乏對其余三味主要成分的抑菌特點研究。另外, 因復(fù)方紫草油屬油劑,與抑菌實驗中菌平板的水相 基質(zhì)相斥,用常規(guī)直接打孔法無法體現(xiàn)抑菌結(jié)果,目 前復(fù)方紫草油的抑菌特點尚未研明。



1 成分單藥對金黃色葡萄球菌抑菌實驗

1. 1 材料

1. 1. 1 微生物


金黃色葡萄球菌 ATCC29213 菌種 純培養(yǎng)物; 培養(yǎng)基按照常規(guī)方法制作。



1. 1. 2 藥物

紫草、白芷、忍冬藤飲片制成的 100 目細粉( 健民藥業(yè)提供) 。



1. 1. 3 試劑與儀器

乙醇( 95%、75%、50%、25%、 15% V/V 濃度) ,蒸餾水,生理鹽水,營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 ( 北京奧博星生物技術(shù)有限公司,批號 20170412) ,瓊 脂粉 ( 北京奧博星生物技術(shù)有限公司,批 號 20180106) 。索式回流提取裝置( 杭州聚同 JTXT250S) 、渦旋振蕩器( 其林貝爾 01-861) 、  循環(huán)水式多用真空泵( 鄭州長城 SHB-III) 、旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀( 鄭州長城 R-1001-VN) 、一次性塑料平板 ( 預(yù)滅菌) ,不銹鋼涂布棒,接種環(huán),打孔器,微量移 液器( 5 ~ 10 μL) ,托盤天平,量筒,游標卡尺等。



1. 2 方法

1. 2. 1 藥液制備


按流程制備紫草、白芷、忍冬藤 不同濃度醇提液及水煎液,具體方法如下: 1) 乙醇回 流提取法: 分別取紫草、白芷、忍冬藤粉劑 25 g,以 8 倍量 95% 乙醇浸泡 30 min 后,75 ℃ 加熱回流提取 1 h,濾過; 在剩余藥粉中加入 6 倍量 95% 乙醇繼續(xù) 回流 1 h,濾過。合并兩次回流提取后所得濾液,以 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀緩慢回收乙醇,剩余液體加入蒸餾水稀 釋至 8 倍量( 每毫升含藥量相當于生藥 0. 125 g) ,進 行封裝。依照上述方法,將乙醇濃度分別置換為 75% 、50% 、25% 、15% ,并取得相應(yīng)的藥液。2) 乙醇 浸泡提取法: 分別取紫草、白芷、忍冬藤粉劑 25 g,加 入 8 倍量 95% 乙醇浸泡 48 h 后,濾過,棄去剩余藥 粉,以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀緩慢回收乙醇,剩余液體加入蒸餾 水稀 釋 至 8 倍 量 ( 每毫升含藥量相當于生藥 0. 125 g) ,進行封裝。3) 水煎提取法: 分別取紫草、 白芷、忍冬藤粉劑 25 g,加入 8 倍量蒸餾水浸泡 30 min 后,煎煮 1 h,靜置降溫沉淀后濾過封裝( 每毫升 含藥量相當于生藥 0. 125 g) 。完成上述全部流程, 即制得 21 種不同藥液,分別標記并放入 4 ℃ 冰箱保 存?zhèn)溆谩?/span>



1. 2. 2 平板打孔法抑菌實驗

取妥善保藏的金黃色葡萄球菌菌種,37 ℃ 無菌條件下培養(yǎng) 18 ~ 24 h,得指數(shù)生長期菌樣本,4 ℃ 冰箱保存。在小試管中 倒入 2 mL 生理鹽水,將接種環(huán)滅菌后,取一定量菌 樣本與生理鹽水配成 108 cfu /mL 菌懸液。調(diào)制滅 菌培養(yǎng)基并倒入一次性塑料培養(yǎng)皿中,每培養(yǎng)皿 10 mL,紫外照射冷卻后,使用微量移液器將 100 μL 菌懸液 加 入 平 板,涂 布 均 勻。用 外 徑 為 ( 5. 52 ± 0. 31) mm 的打孔器( 預(yù)滅菌) 對菌平板進行打孔,每 板 4 孔??组g距不少于 25 mm,孔中心距平皿邊緣 不少于 15 mm。取一種藥液,在菌平板的 3 個孔中 分別加入 50 μL 藥液,剩余 1 孔中加 50 μL 無菌生 理鹽水做為對照。37 ℃ 恒溫培育 24 h。選擇均勻 而完全無菌生長的抑菌環(huán),以游標卡尺測量抑菌圈 直徑。計算平均值。



1. 3 結(jié)果

藥液經(jīng)培養(yǎng)基中的瓊脂擴散自然形成 不同濃度梯度,可以憑抑菌環(huán)的大小顯示不同藥液 的抑菌作用強弱。在相同質(zhì)量藥物的提取物中,紫 草回流提取時使用的乙醇濃度與相應(yīng)提取物的抑菌 效果呈正相關(guān),說明紫草主要抑菌成分在有機相中 的溶解度高于水相; 而紫草水煎提取物抑菌能力優(yōu) 于 15% 乙醇回流提取物,提示紫草水煎液中抑菌有 效成分或與醇提液中抑菌有效成分不同。不同提取 方法所得白芷提取物間抑菌效果差異不顯著,說明 白芷抑菌成分在有機相和水相的溶解度接近,對熱 的穩(wěn)定性較好。忍冬藤回流提取時使用的乙醇濃度 與其相應(yīng)提取物抑菌效果呈負相關(guān),使用 95% 乙醇 浸泡法及水煎法所獲提取物抑菌效果均顯著優(yōu)于 95% 乙醇加熱回流法提取物,說明抑菌成分在水相 中的溶解度高于有機相,長時間受熱易分解。


 

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